摘要： <正>应用ＲＡＰＤ 分子标记手段，研究板栗品种的遗传多样性，建立了板栗品种ＲＡＰＤ 标记的标准程序，以及板栗品种的ＤＮＡ 指纹数据库，为板栗育种提供理论依据，并为板栗品种鉴别提供了准确、可靠的标准方法，主要结果与结论如下：１板栗营养体中酚类化合物和单宁物质含量高，ＤＮＡ 提取和纯化非常困难。本研究对ＣＴＡＢ 法加以改良，总结出能够产生扩增产物的模板ＤＮＡ 提取和纯化方法。２建立了稳定的板栗ＤＮＡ 扩增反应体系。并对影响ＲＡＰＤ 反应效果和特异性的两个关键因子，即对退火温度和镁离子浓度进行研究。板栗ＤＮＡ 扩增反应体系中，反应体积为２０ μＬ。９４ ℃预变性２ ｍｉｎ ，然后执行３８ 个扩增循环，每个循环中，９４ ℃变性３０ ｓ，７２ ℃延伸９０ ｓ，最后７２ ℃延伸７ ｍｉｎ 。从Ｓ系列的Ｓ１ ～Ｓ１００ 共１００ 个引物中筛选出适合板栗基因组ＤＮＡ，能够扩增出稳定产物、扩增谱带清晰、特异性强的１６ 个引物供板栗品种ＲＡＰＤ 分析用。１６ 个引物扩增的位点总数为１１９ 个，特异性多态位点６９ 个，多态位点占总数的５８ ％ 。３研究品种间的遗传多样性。４６ 个板栗品种样品的ＤＮＡ，用１６ 个引物进行扩增反应，产生６９ 个多态位点。研究结果表明，各个位点上遗传多样性程度存在较大差别，有效等位基因数目（Ｎｅ） 最大值为１９９９０ ，最小值为１０４４ ４ ；基因多样度（Ｈ） 的最大值为０４９９ ８ ，最小值为００４２５ ；Ｓｈａｎｎｏｎ 信息指数的最大值为０６９２９ ，最小值为０１０４７ 。所检测位点的平均有效等位基因数目为１５２６ ０ ，平均基因多样度为０３６１８ ，平均信息指数为０ ．８４３ ２ 。有效等位基因数目、平均基因多样度和平均Ｓｈａｎｎｏｎ 信息指数的标准误都较小，分别为０ ．３０９ ６ 、０１４１８ 、０１７４ ８ ，估计精度较高。这三个遗传多样性度量表明板栗品种间具有较高的遗传多样性。品种间遗传距离最大值为０８００ １，相应的遗传共享度为０４４９３ ；品种间遗传距离最小值为００９１０ ，对应的遗传共享度为０９１３ ０ 。遗传距离是评价品种间近缘关系的良好指标。４本研究建立了４６ 个板栗品种的ＤＮＡ 指纹数据库，并分析出这些板栗品种分子鉴别的最优化引物组合。结果表明，采用１６ 个能产生特异扩增产生的引物中的４ 个引物，即可准确鉴别所研究的４６ 个板栗品种。分子分类能够有效地揭示形态相似、经济性状相近或部分地理种源相同的品种间的近缘关系。分子标记方法鉴别品种具有广阔的前景。

Abstract: Gao Handong (College of Forest Resources and Environment Nanjing Forestry University Nanjing 210037)

中图分类号: 

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