南京林业大学学报(自然科学版) ›› 2018, Vol. 42 ›› Issue (03): 51-57.doi: 10.3969/j.issn.1000-2006.201801006
黄 彬,倪州献,周 婷,张往祥,徐立安*
出版日期:
2018-06-06
发布日期:
2018-06-06
基金资助:
HUANG Bin, NI Zhouxian, ZHOU Ting, ZHANG Wangxiang, XU Li'an*
Online:
2018-06-06
Published:
2018-06-06
摘要: 【目的】为探究适用于观赏海棠SSR反应分子标记研究的最佳PCR反应条件,采用正交设计法对观赏海棠SSR-PCR体系进行优化,并利用优化体系筛选适于观赏海棠的多态性SSR引物。【方法】以6个二倍体观赏海棠DNA模板为材料,采用L16(45)正交试验对DNA模板浓度、Taq酶浓度、引物浓度、Mg2+浓度和dNTP浓度进行优化实验,确立了观赏海棠SSR-PCR最佳反应体系。【结果】得出15 μL优化体系各成分为:DNA模板5 mg/L、Taq酶1.25 U、引物0.3 μmol/L、Mg2+ 2 mmol/L、dNTP 0.25 mmol/L、1×Buffer1.5 μL。利用优化体系在73对苹果属SSR引物中筛选出15对条带清晰、多态性丰富、重复性好的SSR 引物并确定各引物的退火温度,其多态信息含量均大于0.25。【结论】正交试验结果达到优化目的,利用优化体系筛选的15对多态性引物可直接应用于观赏海棠SSR分子标记实验中,为观赏海棠品种鉴定、分类以及遗传育种等研究提供了有效工具。
中图分类号:
黄彬,倪州献,周婷,等. 观赏海棠SSR-PCR体系优化及引物筛选应用[J]. 南京林业大学学报(自然科学版), 2018, 42(03): 51-57.
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