以油茶品种大别山2号和赣兴46为试验材料，利用Me5Em8正反向引物组合进行了SRAP-PCR反应体系的L9(34)正交试验，采用正交设计直观分析及方差分析对影响SRAP反应的Taq聚合酶、Mg2+、dNTP和引物浓度进行分析，并对模板DNA浓度进行了单因素试验分析。结果表明，油茶SRAP-PCR 20 μL反应体系的最佳组合为: Taq聚合酶1.20 μmol/min、Mg2+浓度125 mmol/L、dNTP浓度0.15 mmol/L、Primer浓度0.60 μmol/L、模板DNA含量60 ng，并含有2 μL 10×buffer(Mg2+ free)。各因素对油茶SRAP-PCR反应的影响大小依次为:dNTP、 Mg2+ 、Taq聚合酶、Primer。
Abstract
In this paper, orthogonal design to SRAPPCR system for Camellia oleifera cultivar Dabieshan 2 and Ganxing 46 was conducted with the primers combination of Me5 and Em8. Orthogonal designdirect analysis and variance analysis were applied to optimize SRAPPCR amplification system in 4 factors such as Taq DNA polymerase, Mg2+, dNTP and primer. Template DNA was also analyzed by the single element test. The results indicated that an optimal reaction system (20 μL)of SRAPPCR system was established: 120 μmol/min Taq DNA polymerase 125 mmol/L Mg2+, 0.15 mmol/L dNTP, 0.60 μmol/L primer, 60 ng template DNA and 2 μL 10 buffer(Mg2+ free). And, the order of each factor levels affected on the result of SRAPPCR was dNTP, Mg2+, Taq DNA polymerase and primer.
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基金
收稿日期：2010-10-25修回日期：2011-02-23基金项目：“十一五”国家科技支撑计划（2009BADB1B04）作者简介：吴莺莺(1961—)，硕士生。*彭方仁(通信作者)，教授。Email: frpeng@njfu.edu.cn。
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